實(shí)驗(yàn)對象與方法

1.實(shí)驗(yàn)對象與分組

健康雄性2月齡SD(Sprague-Dawley)大鼠56只，體質(zhì)量220g±10g，購于山東中醫(yī)藥大學(xué)動物中心（實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量合格證號：SCXK魯20090008）。分籠飼養(yǎng)，每籠4只；普通鼠全價顆粒飼料Ⅱ號，自由飲食、飲水，室溫22℃±2℃，相對濕度40%~60%。按照本實(shí)驗(yàn)要求將實(shí)驗(yàn)動物隨機(jī)分為：安靜對照組(S組，n=8)、運(yùn)動對照組(E組，n=24)、中藥運(yùn)動組(CE組，n=24)。最后一次力竭運(yùn)動后又將E組和CE組分別隨機(jī)分為運(yùn)動后即刻組(E0組，n=8、CE0組，n=8)，恢復(fù)期12h組(E1組，n=8、CE1組，n=8)，恢復(fù)期24h組(E2組，n=8、CE2組，n=8)。

2.實(shí)驗(yàn)方法

1)運(yùn)動方案

S組不施加任何干擾因素，給食給水，置于籠中自然生長。E組和CE組按照制定的運(yùn)動方案進(jìn)行跑臺訓(xùn)練。運(yùn)動速度、時間根據(jù)Bedford理論[7]設(shè)計，大鼠體質(zhì)量/攝氧量回歸方程所建立的遞增速度和時間的運(yùn)動訓(xùn)練方式。參考國內(nèi)學(xué)者[8-9]使用過的運(yùn)動疲勞模型，并根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況略加修改，取材前最后一次運(yùn)動至力竭。具體運(yùn)動速度和時間安排如表1所示。

2)給藥方案

復(fù)方中藥制備：由肉桂3g，人參、白術(shù)、茯苓、甘草、當(dāng)歸、川芎、白芍藥、熟地、補(bǔ)骨脂各9g組成，藥物購自山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，水煎過濾濃縮為1g/mL，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩E組給予復(fù)方中藥水溶劑1mL/100g灌胃，S組和E組灌服1mL/100g生理鹽水（0.9%），每次運(yùn)動前3h灌胃。

3)動物取材

最后一次力竭運(yùn)動后，S組、E0組、CE0組立即腹腔注射10%水合氯醛糖漿（0.3mL/100g）麻醉，打開腹腔腹主動脈取血5mL置于試管中，37℃水浴30min后3500r/min轉(zhuǎn)速離心15min取上層血清，待測血清肌酸激酶（CK）、尿素氮（BUN）、睪酮（T）。迅速剝離取出后肢股四頭肌，置于冰冷生理鹽水中洗凈血漬，用濾紙吸干，置于EP管內(nèi)，放于–80℃超低溫冰箱內(nèi)冷凍待勻漿后測骨骼肌丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。E1組、CE1組和E2組、CE2組分別于運(yùn)動后12h和24h做上述同樣取材。

4)骨骼肌組織勻漿制備

稱取洗凈血漬并用濾紙吸干的股四頭肌0.3g，剪碎倒入玻璃勻漿管中，加入2.7mL冰冷的生理鹽水，充分研碎，使組織勻漿化。將制備好的10%骨骼肌勻漿液用低溫離心機(jī)2000r/min轉(zhuǎn)速離心15min后取上清液，待測骨骼肌勻漿液蛋白濃度及MDA含量和SOD活性。

5)測試方法及儀器

用ECOM-F6124半自動生化分析儀（德國產(chǎn)）測CK（速率法）和BUN（酶偶聯(lián)速率法）；用ACCESS全自動微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)（美國和法國合產(chǎn)）測T（化學(xué)發(fā)光法）；用722s可見分光光度計（中國產(chǎn)）測骨骼肌MDA（TBA法）、SOD（黃嘌呤氧化酶法），具體操作方法嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

6)數(shù)據(jù)統(tǒng)計與處理

對數(shù)據(jù)的統(tǒng)計和分析采用SPSS17.0軟件系統(tǒng)，結(jié)果數(shù)據(jù)均以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±SD）表示。對大鼠運(yùn)動時間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析；對S組、E組、CE組不同時相之間MDA和SOD采用單因素方差分析（One-WayANOVA）分析，在方差分析前對樣本進(jìn)行齊次性檢驗(yàn)，當(dāng)樣本所在總體方差不齊性時，應(yīng)采用Tamhane方法進(jìn)行后續(xù)檢驗(yàn)的多重比較（PostHocMultipleComparisons）；總體方差齊性，采用LSD方法進(jìn)行后續(xù)檢驗(yàn)的多重比較。顯著性差異水平為P?0.05，極顯著性差異水平P?0.01。

結(jié)果

1.運(yùn)動對照組大鼠血清CK、BUN、睪酮與安靜對照組比較結(jié)果：S組、E0組、E1組、E2四組之間血清CK、BUN、T指標(biāo)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果如表2所示。上表顯示，血清CK，E0組顯著性高于S組（P?0.05）；E1組顯著性高于E0組（P?0.05）；E1組、E2組顯著性高于S組（P?0.01）。血清BUN，E0組顯著性高于S組（P?0.05）；E1組顯著性低于E0組（P?0.05），E2組顯著性低于E0組（P?0.01）。血清T，E0組顯著性低于S組（P?0.01）。

2.運(yùn)動對照組疲勞及恢復(fù)期不同時相骨骼肌MDA和SOD變化結(jié)果：S組、E0組、E1組、E2四組之間骨骼肌MDA含量和SOD活性進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果如表3所示。

3.中藥運(yùn)動組疲勞及恢復(fù)期不同時相骨骼肌MDA和SOD變化結(jié)果：S組、CE0組、CE1組、CE2四組之間骨骼肌MDA含量和SOD活性進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果如表4所示。上表顯示，大鼠骨骼肌MDA，CE0組顯著高于S組（P?0.01），CE1組、CE2組顯著低于CE0組（P?0.01）且與S組沒有統(tǒng)計學(xué)差異。骨骼肌SOD，CE1組、CE2組顯著高于CE0組（P?0.01），CE2組顯著高于S組（P?0.05）。

4.各組相同時相MDA含量比較結(jié)果：對S組、E組、CE組在運(yùn)動后即刻、恢復(fù)期12h、恢復(fù)期24h的MDA含量分別進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果統(tǒng)計如下圖所示。圖1顯示，運(yùn)動后即刻，運(yùn)動對照（E0）組和中藥運(yùn)動（CE0）組骨骼肌MDA都顯著高于安靜對照（S）組（P?0.01），中藥運(yùn)動組顯著低于運(yùn)動對照組（P?0.01）。恢復(fù)期12h，運(yùn)動對照（E1）組顯著高于安靜對照（S）組（P?0.01），中藥運(yùn)動（CE1）組顯著低于運(yùn)動對照（E1）組（P?0.01）且與安靜對照（S）組沒有統(tǒng)計學(xué)差異。恢復(fù)期24h，各組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異。

5.各組相同時相SOD活性比較結(jié)果：對S組、E組、CE組在運(yùn)動后即刻、恢復(fù)期12h、恢復(fù)期24h的SOD活性分別進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果統(tǒng)計如下圖所示。圖2顯示，運(yùn)動后即刻，運(yùn)動對照（E0）組和中藥運(yùn)動（CE0）組骨骼肌SOD活性都下降，但無統(tǒng)計學(xué)差異。恢復(fù)期12h，運(yùn)動對照（E1）組骨骼肌SOD活性顯著低于安靜對照（S）組（P?0.05），中藥運(yùn)動（CE1）組顯著高于運(yùn)動對照（E1）組（P?0.01）。恢復(fù)期24h，中藥運(yùn)動（CE2）組顯著高于安靜對照（S）組和運(yùn)動對照（E2）組（P?0.05）。

6.各組大鼠跑臺運(yùn)動力竭時間：運(yùn)動對照組（E組）和中藥運(yùn)動組（CE組）大鼠最后一次以38m/min的速度運(yùn)動至力竭，運(yùn)動力竭時間如表5所示。上表顯示出，運(yùn)動對照組跑臺運(yùn)動力竭時間為66.78min±3.53min，而中藥運(yùn)動組力竭時間為82.09min±5.19min，顯著高于運(yùn)動對照組（P?0.01），平均延長比率為23.2%。

分析與討論

1.運(yùn)動疲勞模型本實(shí)驗(yàn)運(yùn)動疲勞模型：采用大鼠7周大強(qiáng)度遞增負(fù)荷跑臺運(yùn)動方式，運(yùn)動方案根據(jù)Bedford大鼠體質(zhì)量/攝氧量回歸方程所建立的遞增速度或時間的運(yùn)動訓(xùn)練方式設(shè)計[7]。第1周運(yùn)動速度15m/min、時間20min，小于60%O2max；第2~6周運(yùn)動速度22~35m/min、時間20~30min，屬于70~95%O2max；第7周運(yùn)動速度38m/min、時間30min，屬大于95%O2max；取材前最后一次運(yùn)動至力竭（運(yùn)動速度38m/min，運(yùn)動時間50~60min，根據(jù)Bedford理論推斷屬于100%O2max）。大量研究表明，力竭運(yùn)動后血清BUN顯著性高于安靜對照組（P?0.05）、血清T顯著性低于安靜對照組（P?0.05）、MDA顯著性高于安靜對照組（P?0.05）、SOD低于安靜對照組（P?0.05）[9-12]。本實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)過7周大強(qiáng)度遞增負(fù)荷跑臺訓(xùn)練后，測得大鼠血清及骨骼肌相關(guān)指標(biāo)如表2、表3顯示，運(yùn)動后即刻血清BUN、MDA明顯高于對照組（P?0.05）、血清T明顯低于對照組（P?0.05）、SOD低于對照組。該結(jié)果完全符合前人相關(guān)研究的結(jié)論，表明本實(shí)驗(yàn)中使用的7周大強(qiáng)度遞增負(fù)荷跑臺訓(xùn)練疲勞模型已成功建立。