材料與方法

1.試驗動物與儀器：取健康湛江雞１０只，體質(zhì)量（１５±０２）ｋｇ，日齡（１１０±５）ｄ。主要儀器為活體微循環(huán)觀察顯微鏡（廣州啟躍光電儀器有限公司，增設(shè)底部投射光源）。

2.方法：

1）胸腺的血管觀察：將雞窒息處死，靜置１ｈ，待血液在體內(nèi)凝固。將頸部皮膚從腹側(cè)正中劃開，暴露胸腺，整體泡入體積分?jǐn)?shù)為２０％甲醛中固定１ｄ后，血液凝固呈黑色，解剖觀察頸部血管走向及供應(yīng)胸腺的血管。

2）活體觀察胸腺微循環(huán)狀態(tài)：試驗動物稱質(zhì)量。頸部、胸部去毛，消毒，保定，頸部中線切開皮膚，找到胸腺，將頸部皮膚固定在特制手術(shù)臺上，涂以鏡油，增設(shè)底部光源，在微循環(huán)觀察儀下觀察血管走向，血流狀態(tài)等。觀察過程中用３７℃林格氏液保溫保濕。

3）墨汁灌注透明標(biāo)本制作：灌注液：質(zhì)量濃度為００５ｇ／ｍＬ的明膠墨汁（加入體積分?jǐn)?shù)為２％的甲醛）。動靜脈透明標(biāo)本制作：活體觀察結(jié)束后，在胸腔入口從頸總動脈和靜脈灌入含抗凝劑的生理鹽水沖洗血管，再灌入１０ｍＬ體積分?jǐn)?shù)為１０％的甲醛，隨后立即將灌注液緩慢并保持一定壓力地灌入。灌注后結(jié)扎血管，取下胸腺，然后泡入體積分?jǐn)?shù)為１０％甲醛中固定１～２ｄ。胸腺微血管透明標(biāo)本制作：固定后的胸腺用體積分?jǐn)?shù)為１０％的Ｈ２Ｏ２漂白１～２ｄ，光照催化，漂白后用流水洗凈。使用經(jīng)典的冬青油透明法透明：梯度脫水方法參照解剖學(xué)試驗技術(shù)，取出標(biāo)本后切成約１５０μｍ的透明厚片，浸泡在冬青油中用解剖顯微鏡觀察。

4）蘇木精：－伊紅染色切片制作常規(guī)ＨＥ染色。

5）圖像觀察及處理：從每組制得的胸腺切片中隨機抽取１０張，在顯微鏡下于每張切片上隨機選擇５個視野，利用圖像分析系統(tǒng)，測定小葉間動、靜脈直徑，各級毛細(xì)血管直徑和微血管面積密度，前３者每個視野測定４個值，再取其平均值。

6）數(shù)據(jù)統(tǒng)計：分析統(tǒng)計結(jié)果均用ｘ?±ＳＤ表示，各統(tǒng)計結(jié)果均采用ＳＰＳＳ１７０進(jìn)行分析。單因素方差分析采用Ｏｎｅ?ｗａｙＡＮＯＶＡ模塊，組間比較采用ＬＳＤ法。

結(jié)果與分析

1.胸腺微循環(huán)觀察

1)雞胸腺血管供應(yīng)：試驗觀察到雞的胸腺位于頸部氣管兩側(cè)皮下，與頸淺靜脈、迷走神經(jīng)、迷走動脈等包在同一個筋膜鞘內(nèi)。左右各７葉，共１４葉，顏色粉紅（甲醛固定后顏色呈灰白）。胸腺的主要血液供應(yīng)來自于迷走動脈，這是一條起自頸總動脈干的細(xì)小分支，分布至頸部內(nèi)臟和頸中段的被皮，沿途再分支為胸腺供應(yīng)血液。迷走動脈上升至顱底與枕動脈發(fā)出的降支吻合。流出左右兩側(cè)胸腺的靜脈分別匯入左右頸靜脈，在胸腔入口處與鎖骨下靜脈匯合成左右前腔靜脈。流出胸腺的靜脈，有的直接匯入頸淺靜脈，有的則匯入到從皮膚收集靜脈血液的分支中，再并入頸淺靜脈。

2)微循環(huán)動態(tài)觀察：本試驗雞的胸腺平均厚度為２６ｍｍ，通過活體微循環(huán)顯微鏡觀察到胸腺小動脈、分支毛細(xì)血管、網(wǎng)狀毛細(xì)血管、小靜脈等（圖２Ａ）。微血管管徑粗細(xì)不一（圖２Ｂ）。常能觀察到血管的吻合支（圖２Ｃ）及微血管的線流、粒流和線粒流（圖２Ｄ）。細(xì)動脈分支形成毛細(xì)血管，管徑細(xì)（約４～６μｍ），走行長而直，形狀剛健，血流快。分支毛細(xì)血管注入網(wǎng)狀毛細(xì)血管，互相交聯(lián)，走行彎曲，網(wǎng)狀毛細(xì)血管管徑較分支毛細(xì)血管粗（約５～８μｍ），血流較慢，匯集入集合毛細(xì)血管。集合毛細(xì)血管管徑較粗（約８～１２μｍ），走行彎曲，外觀柔軟，途徑長短不一，血流較網(wǎng)狀毛細(xì)血管快，注入細(xì)靜脈（圖２Ａ，２Ｂ，２Ｅ）。

3)雞胸腺組織結(jié)構(gòu)觀察：ＨＥ染色切片觀察到每葉胸腺的被膜結(jié)締組織向腺體內(nèi)發(fā)出許多膈，將胸腺分隔成許多小葉，血管隨其進(jìn)入胸腺內(nèi)。每個小葉可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)（圖３Ａ）。皮質(zhì)濃染而髓質(zhì)淡染，雞胸腺中不易找到像哺乳動物那樣典型的胸腺小體。試驗雞未經(jīng)放血處理，胸腺中血管內(nèi)仍留有紅細(xì)胞，易于觀察血管大致位置。管徑較大的血管主要分布在小葉間和皮髓質(zhì)交界處，在皮質(zhì)中毛細(xì)血管密度明顯大于髓質(zhì)中毛細(xì)血管密度（圖３Ｂ）。

4)雞胸腺的微血管分布：試驗結(jié)果顯示來自頸總動脈分支的迷走動脈，與頸淺靜脈、迷走神經(jīng)和胸腺鏈包裹在同一筋膜鞘中，沿途分支的主干供給頸部皮膚上的血管，發(fā)出小分支到胸腺的中央部位，進(jìn)而分支成血管樹穿透實質(zhì)形成毛細(xì)血管網(wǎng)。每個獨立的胸腺小葉有２條動脈分布。逐漸分支的小動脈沿著皮髓質(zhì)交界處，注入到皮質(zhì)和髓質(zhì)的毛細(xì)血管中。而另一類皮質(zhì)動脈，進(jìn)入胸腺后，其分支到皮質(zhì)的毛細(xì)血管中。也發(fā)現(xiàn)一些發(fā)卡狀的小動脈，起源于髓質(zhì)動脈，并且供應(yīng)皮質(zhì)的毛細(xì)血管，在動脈和靜脈血管之間起到通路作用（圖４Ａ）。觀察發(fā)現(xiàn)皮質(zhì)中的毛細(xì)血管比髓質(zhì)中的分布更為稠密（圖４Ｂ）。皮質(zhì)小動脈呈放射狀從皮髓質(zhì)交界處向外皮層延伸，并匯入到皮質(zhì)邊緣的小靜脈中。在外皮層，許多皮質(zhì)小動脈呈現(xiàn)螺旋、彎曲狀（圖４Ｃ），也流通到皮質(zhì)表面的小靜脈中。但髓質(zhì)小動脈則形成毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)，與靜脈連通（圖４Ｄ）。胸腺中靜脈系統(tǒng)：髓質(zhì)比皮質(zhì)中的分布更密（圖４Ｄ）。在胸腺髓質(zhì)，尤其是皮髓質(zhì)交界處，常常觀察到彎曲迂回的小靜脈（圖４Ｂ）。這些小靜脈起源于皮質(zhì)或髓質(zhì)，形成髓質(zhì)靜脈，并與小葉間靜脈連接。這些靜脈的血管內(nèi)皮表面，能夠觀察到淋巴細(xì)胞穿透內(nèi)皮細(xì)胞層（圖４Ｅ）。在胸腺表面上，許多皮質(zhì)的靜脈收集了皮質(zhì)中毛細(xì)血管的血流，并匯入到小葉間靜脈（圖４Ｆ）。這些皮質(zhì)靜脈多數(shù)與穿過皮質(zhì)隔或?qū)嵸|(zhì)的髓質(zhì)靜脈匯合或吻合。皮質(zhì)的血管不存在血管周圍間隙。

討論與結(jié)論

1.關(guān)于本試驗所采用的微循環(huán)研究方法

本試驗主要選用了組織切片和灌注墨汁的方法進(jìn)行形態(tài)學(xué)研究，用活體微循環(huán)觀察儀進(jìn)行生理學(xué)研究。鏡下觀察組織切片方法，可以了解微血管的斷面形態(tài)、結(jié)構(gòu)，能夠觀察微血管和其周圍組織的關(guān)系。但一般組織切片僅能反映約５μｍ厚的斷面結(jié)構(gòu)，不能了解微血管立體分布、走行。為了補救組織切片方法的缺陷，可以采用連續(xù)切片，逐片觀察、描繪、復(fù)制的方法。這種方法，除具有組織切片方法的優(yōu)點外，又能描繪出微血管的立體分布、走行和相互關(guān)聯(lián)。早期的研究利用這種方法認(rèn)識了一些臟器，如脾臟等的微血管的分布形態(tài)。但也存在著工作量過大，缺少真實感等缺陷。因而在本試驗中，選用灌注墨汁后制作透明標(biāo)本的方法彌補了組織切片觀察的片面性。在血管中注入墨汁充盈微血管，再將組織透明，便可以在解剖鏡下清晰地觀察到微血管的分布、形態(tài)以及微血管的相互關(guān)系。理想的血管內(nèi)灌注液應(yīng)具備接近血液的黏稠度和較好的流動性。試驗采用質(zhì)量濃度為００５ｇ／ｍＬ明膠墨汁。灌注后選用冬青油與苯甲酸甲酯混合液透明組織，透明效果好。胸腺浸泡在透明液中，在解剖鏡下能清晰、直觀地觀察到微血管的分布、走行、形態(tài)，以及細(xì)動脈、毛細(xì)血管、細(xì)靜脈的相互關(guān)系等。試驗證明，這種傳統(tǒng)的墨汁灌注透明法操作簡單、所需的設(shè)備普通常見，不失為一種比較實用的微循環(huán)形態(tài)學(xué)研究方法。試驗采用活體微循環(huán)顯微儀進(jìn)行直接的活體微循環(huán)觀測。本試驗在原有的顯微鏡落射光源的基礎(chǔ)上，在底部添加透射能力強、亮度大的冷光源，能較為清晰地觀察到血流動態(tài)，轉(zhuǎn)動微調(diào)時，能觀察到不同高低層次的微血管。但動物不可能完全地安靜，試驗中，觀測部位在雞的頸部，雞只的呼吸活動等會對活體觀察造成影響，不容易得到清晰連貫的微循環(huán)錄像，這也是本試驗所欠缺的地方?？偟膩碚f，本試驗從宏觀到微觀，從靜態(tài)到動態(tài)比較詳細(xì)地觀察了雞胸腺微循環(huán)。